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m6A RNA甲基化定量檢測試劑盒(熒光法)
眾所周知,在真核生物中,m6A (N6-methyladenosine)是在RNA分子中最常見的和豐富存在的。這種修飾是由m6A催化甲基轉(zhuǎn)移酶復雜METTL3和最近發(fā)的m6A RNA 去甲基轉(zhuǎn)移酶如FTO和ALKBH5,這種 m6A RNA去甲基是以α-ketoglutarate m6A(α-KG)-和Fe2+-方式進行的。 結(jié)果表明, 在許多生物過程中,如從生命發(fā)展和代謝生育,METTL3,FTO和ALKBH5扮演著重要角色。超過80%的m6A是以RNA 甲基化的形式存在于不同的物種。 m6A主要分布在mRNA和也發(fā)生在非編碼RNA(ncRNA)如tRNA,rRNA和snRNA。相對豐富的m6A在mRNA轉(zhuǎn)錄時已經(jīng)表明影響核糖核酸代謝過程,如拼接,核出口,翻譯能力和穩(wěn)定性,RNA轉(zhuǎn)錄。異常甲基化水平的m6A誘導缺陷甲基化酶和m6A RNA去甲基酶可能導致RNA功能障礙的和疾病發(fā)生。例如,異常低水平在正常m6A目標由于增加患者FTO活動、FTO基因突變,通過迄今還未通路,導致了肥胖和相關疾病的發(fā)作。動態(tài)和可逆化學m6A修飾,在RNA中也可以作為一種新穎的表觀遺傳標記的生物學,意義深遠可以預見。因此,更多的有用的信息,更好理解m6A RNA甲基化水平和分布對RNA轉(zhuǎn)錄、診斷和治療疾病非常有益。 該產(chǎn)品中,總RNA必將結(jié)合在微孔板上,使用一種高特異性的RNA溶液方案。使用特異性較強的捕獲抗體和檢測抗體來分析m6A。檢測產(chǎn)生的增強信號,然后通過讀取在微型板分光光度計波長為450 nm處吸光度進行比色定量。m6A的數(shù)量與測量的OD值強度是成正比的。在這個試劑盒中包括陽性和陰性對照。繪制標準曲線 (范圍:0.02到1 ng的m6A)或單點對照的m6A可以用作陽性對照。因為m6A的含量,在不同的組織,正常和病變的部位,或在處理過以及未處理的條件下,我們建議運行2份樣品,以確保信號生成的可信心性。這套解決方案將允許研究人員選擇定量一個絕對數(shù)量的m6A或確定相對m6A RNA甲基化狀態(tài)的兩個不同的RNA樣品。 該款產(chǎn)品擁有一套完整的優(yōu)化緩沖液和試劑體系,可以采用比色或熒光法來定量總RNA中的 m6A (N6-methyladenosine)。對于總RNA(從哺乳動物,各種組織或細胞樣本如像培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿培養(yǎng)的細胞,新鮮和冷凍的組織,石蠟包埋組織,血液,體液,植物,真菌,細菌和病毒等任何樣本中提取的) 中m6A直接定量檢測甲基化狀態(tài)是非常理想的。
在mRNA中m6A甲基化是可逆的(文獻1)
m6A RNA甲基化定量檢測試劑盒(熒光法) 具有以下優(yōu)勢和特點:
- 類似于Elisa步驟的熒光法檢測方便快速。整個操作步驟可在3小時50分鐘完成。
- 高敏,檢測的最低下限為 5 pg 的 m6A 。
- 獨特的結(jié)合液容許>70 nts 的RNA緊緊的結(jié)合在孔上,可以定量檢測來自mRNA和ncRNA如tRNA,rRNA和snRNA。
- 優(yōu)化的抗體和增強劑溶液可以特異的定量檢測m6A,對于特定片段腺苷濃度范圍的未甲基化樣本RNA不會產(chǎn)生交叉反應。
- 包括的陰性和陽性對照,對于來自任何種屬的m6A都可以實現(xiàn)定量檢測。
- 96孔可拆卸板模式使研究人員能根據(jù)自己需要選擇手工或是高通量模式分析。
- 操作簡便、可信、分析條件始終如一。
產(chǎn)品組分
組分內(nèi)容 |
型號:A-P-9008-48(48次) |
型號:A-P-9008-96(96次) |
儲存溫度 |
|
WB |
10X Wash Buffer |
14 ml |
28 ml |
4°C |
BS |
Binding Solution |
5 ml | 10 ml | 室溫 |
NC |
Negative Control,0% 5-mC,100ug/ml * |
10 ul |
20 ul |
-20°C |
PC |
Positive Control,m6A,2ug/ml * |
10 ul |
20 ul |
-20°C |
CA |
Capature Antibody,1000X* |
5 ul | 10 ul | 4°C |
DA |
Detection Antibody,1000X* |
6 ul | 12 ul | -20°C |
ES |
Enhancer Solution |
5 ul | 10 ul | -20°C |
FD | Fluoro Developer* | 8 ul | 16 ul | -20°C |
FE |
Fluoro Enhancer |
8 ml | 16 ml | 4°C |
DB |
Dilution Buffer |
4 ml |
8 ml |
室溫 |
8-聯(lián)管 |
8-Well Assay Strips(With Frame) |
6 |
12 |
4°C |
操作手冊 |
|
1 |
1 |
室溫 |
文件資源
文件下載 | 文件內(nèi)容 | 資源說明 |
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注意事項
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警告 | 本品僅供科研使用,請勿用于臨床與診斷。 |
FAQ
Zheng Y et. al. (October 2022). LncNAP1L6 activates MMP pathway by stabilizing the m6A-modified NAP1L2 to promote malignant progression in prostate cancer. Cancer Gene Ther.
Wu et. al. (September 2021). Comprehensive Analysis of m5C RNA Methylation Regulator Genes in Clear Cell Renal Cell Carcinoma Int'l Journal of Genomics. 2021
Zeng M et. al. (August 2020). Critical roles of mRNA m<sup>6</sup>A modification and YTHDC2 expression for meiotic initiation and progression in female germ cells. Gene. 753:144810.
Wu C et. al. (August 2020). Interplay of m<sup>6</sup>A and H3K27 trimethylation restrains inflammation during bacterial infection. Sci Adv. 6(34):eaba0647.
Zhang C et. al. (June 2019). Reduced m6A modification predicts malignant phenotypes and augmented Wnt/PI3K-Akt signaling in gastric cancer. Cancer Med.
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