我們提供高得率和高性價(jià)比的 mRNA 和長鏈RNA（多個(gè)堿基）的定制合成。在微克到毫克的級(jí)別上，開展廣泛的mRNA修飾服務(wù)。mRNA 可從客戶提供的 DNA 模板生成；或者我們可以從零開始， 提供完整的mRNA體外合成。我們?yōu)樗械臉?biāo)準(zhǔn) mRNA 片段進(jìn)行 mCAP、ARCA 和 EZ Cap加帽或修飾核苷酸的處理。

Modified Nucleotide-containing mRNA Synthesis

mRNA體外轉(zhuǎn)錄合成（IVT, in vitro transcription）

為了mRNA能最終有效地在體外翻譯， 需要在體外轉(zhuǎn)錄合成mRNA時(shí)，摻入5’端的m7G加帽結(jié)構(gòu)和3’端的多聚腺苷酸[poly(A)尾]結(jié)構(gòu)。加帽的過程，是通過T7 RNA 聚合酶共轉(zhuǎn)錄，在mRNA分子5’端摻入諸如ARCA (Anti-Reverse Cap Analog)。 加尾的過程，是用Poly(A)聚合酶在mRNA分子3’端，加上poly(A)尾， 再用DNase酶消化DNA模板。5-甲基-胞苷(5-Methyl-CTP), 假尿苷(Pseudo/ ψ-UTP)和其他修飾核苷酸也可摻入mRNA, 來降低免疫原性和加強(qiáng)穩(wěn)定性。合成后的mRNA適用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染、微注射、體外翻譯和RNA疫苗等。

定制合成 的mRNA 擁有廣泛的應(yīng)用：

• 用于基因組編輯的mRNA，比如Zinc-finger Nuclease mRNA，TALEN mRNA，Cas9 mRNA和Recombinase mRNA等。
• 報(bào)告基因的mRNA，比如EGFP mRNA和 Luc mRNA, 用于熒光顯微鏡、流細(xì)胞測量和生物發(fā)光成像等。
• 重組mRNA, 用于non-integrating generation of iPSC。

產(chǎn)品驗(yàn)證:

mRNA純化:

由T7 RNA聚合酶在體外轉(zhuǎn)錄合成的mRNA，可能含有各種污染物：比如未反應(yīng)完全的小分子底物、反應(yīng)所需的蛋白酶，以及反應(yīng)中產(chǎn)生的非特異性產(chǎn)物，如過短或過長或未完全加帽的mRNA等。 某些RNA序列甚至?xí)T導(dǎo)高水平的免疫原性。

IVDSHOW提供高效的純化技術(shù)，可去除相關(guān)污染物，從而提高下游應(yīng)用的處理效率。

硅膠膜純化柱（Silica-gel Membrane Spin Column）

它是一種用于快速核酸純化的固相萃取技術(shù)。mRNA可以在特定條件下，結(jié)合到硅凝膠膜的固相，并在水中或TE (pH 7)中進(jìn)行后續(xù)洗滌和洗脫步驟。這種方法清除了大多數(shù)蛋白質(zhì)、DNA和NTPs。

HPLC純化法（ÄKTA avant系統(tǒng)）：

mRNA的純化，可以通過ÄKTA avant系統(tǒng)，使用alkylated non-porous polystyrene-divinylbenzene copolymer microspheres和優(yōu)化的緩沖體系，然后進(jìn)行mRNA分析和mRNA分離。

HPLC 純化法可以從體外合成和化學(xué)修飾后的mRNA 中，去除雙鏈DNA和其他污染物，使 mRNA 具有更高水平的翻譯，減少免疫原性或 RNA sensor激活。

我們所有的 mRNA 產(chǎn)品都提供：

• 將mCAP/ARCA/EZ Cap摻入到轉(zhuǎn)錄合成的mRNA片段中，以提高翻譯效率。
• 通過加入經(jīng)過修飾的核苷酸（5mCTP, ψUTP）和poly（A）尾，減少宿主細(xì)胞免疫反應(yīng)并增強(qiáng)穩(wěn)定性。
• 在合成mRNA過程中，加入DNase酶，降解DNA模板。
• 用磷酸酶去除RNA末端的5'三磷酸鹽(5’ triphosphates)，進(jìn)一步減少哺乳動(dòng)物細(xì)胞的先天免疫反應(yīng)。
• 采用強(qiáng)大的純化系統(tǒng)，提供高產(chǎn)量的 mRNA來適應(yīng)大多數(shù)下游應(yīng)用。

產(chǎn)品驗(yàn)證: