NK細(xì)胞密度低？

細(xì)胞生長緩慢？

達(dá)不到理論培養(yǎng)效果？

究竟是哪一步出了問題？

該怎么排查結(jié)果不理想的原因？

實(shí)際上，在進(jìn)行NK細(xì)胞的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，影響最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素非常多。為了幫助客戶解決問題，我們根據(jù)以往經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，為大家整理了實(shí)驗(yàn)過程中最容易被大家忽視但卻極易影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的四個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)，希望大家實(shí)驗(yàn)路上能夠順風(fēng)順?biāo)?/span>

一、采血環(huán)節(jié)需注意

（1）為了避免抗凝劑占比過高影響自體血漿的使用，應(yīng)使臍血中的抗凝劑占比低于30%。如用采血袋采集血樣，建議使用100mL容量的采血袋。如果采血時(shí)用200mL采血袋，建議取出14mL 抗凝劑。

（2）因?yàn)镋DTA會(huì)影響NK細(xì)胞的激活與擴(kuò)增，采集血樣時(shí)禁止使用 EDTA 抗凝的真空采樣管，可以選用肝素鈉抗凝的真空采血管。

二、無血清培養(yǎng)基配制與補(bǔ)液

（1）高性能版培養(yǎng)基配制

激活培養(yǎng)基：200mL基礎(chǔ)+200uL YC00C。第0天配。D0-D5使用。

擴(kuò)增培養(yǎng)基：1.8L基礎(chǔ)+1.8mL YC005。第7天配。D7開始使用。

（2）標(biāo)準(zhǔn)版培養(yǎng)基配制

培養(yǎng)基A：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+YC005，第0天配。D0及D9后使用。

培養(yǎng)基B：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+YC005+YC00C，第3天配。D3-D9使用。

（3）每次補(bǔ)液時(shí)添加的培養(yǎng)基需預(yù)溫，用多少取多少，禁止將整瓶培養(yǎng)基預(yù)溫、禁止反復(fù)預(yù)溫。

（4）培養(yǎng)基現(xiàn)配現(xiàn)用，配成完全培養(yǎng)基后4°C保存。

三、無血清培養(yǎng)基配制與補(bǔ)液

（1）使用TC處理水平較高的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)瓶，2L體系套裝建議以2個(gè)T25瓶起始培養(yǎng)。

（2）盡可能使用大體積的培養(yǎng)袋，促進(jìn)細(xì)胞間的氣體交換，防止代謝廢物過多影響細(xì)胞增殖。如采用1L培養(yǎng)體系，推薦使用2L培養(yǎng)袋；采用2L培養(yǎng)體系，推薦每個(gè)1L體系使用1.8L培養(yǎng)袋。

（3）剛?cè)氪鼤r(shí)，一般細(xì)胞培養(yǎng)袋大而細(xì)胞液體積小，建議將培養(yǎng)袋對折使用（d7），選擇合適的底面積培養(yǎng)。

（4）接種密度

外周血的推薦接種密度為1.5-2E6cells/mL。臍血UCBMC的推薦接種密度為2.5-3E6cells/mL。

四、避免細(xì)胞機(jī)械損傷

（1）細(xì)胞接種后，第1-3天會(huì)形成懸浮細(xì)胞小團(tuán)，第3-5天絕大部分懸浮細(xì)胞團(tuán)貼壁，不可將其晃起，第5-7天貼壁的細(xì)胞團(tuán)變大、變多，這些都是正常的細(xì)胞形態(tài)。

（2）培養(yǎng)前期一定不要吹打細(xì)胞團(tuán)（D0-D5），以減少細(xì)胞機(jī)械損傷。

注：高性能版產(chǎn)品對實(shí)驗(yàn)人員標(biāo)準(zhǔn)操作要求更為嚴(yán)格，對試劑盒穩(wěn)定性更為敏感，完全培養(yǎng)基切忌反復(fù)預(yù)溫，接種密度可大不可小。有任何實(shí)驗(yàn)操作前后的疑問都可同廠家技術(shù)人員溝通。

◆NK培養(yǎng)基產(chǎn)品選型指南◆

我們的NK細(xì)胞無血清培養(yǎng)基套裝5.0最主要的特點(diǎn)就是支持全樣本、全場景的培養(yǎng)，您可以根據(jù)不同的培養(yǎng)需求而選擇不同版本的產(chǎn)品，參考依據(jù)如下：